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杂志信息/Information
  • 刊名:癌症进展
  • Oncology Progress Journal
  • 主管: 中华人民共和国国家卫生健康委员会
  • 主办:中国医学科学院
  • 社长:袁钟
  • 主编:赵平
  • 《癌症进展》杂志
  • 编辑部/通联部:李老师、沈老师
  • 电话:010-65264353
    010-69155967
  • E-mail:azjzzz@163.com
  • 地址:北京东单三条9号
  • 邮编:100730
  • 网站(投稿平台)www.aizhengjinzhang.com
  • 国内统一刊号:CN 11-4971/R
  • 国际标准刊号:ISSN 1672-1535
  • 邮发代号:80-243
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2016 年第 1 期 第 14 卷

沉默Glut-1表达对食管鳞癌细胞株TE-13增殖和迁移的影响

作者:

单位:

关键词:食管鳞癌Glut-1增殖细胞周期迁移

  • 摘要:
  • 【摘要】目的:沉默葡萄糖转运蛋白-1(glucose transporter protein-l,Glut-1)的表达对食管鳞癌TE-13细胞增殖、周期及迁移的影响,并探究可能的作用机制。 方法:采用慢病毒感染的方法将特异性针对Glut-1基因的Glut-1-shRNA转入TE-13细胞,建立稳定干扰Glut-1表达的TE-13细胞株,分成Glut-1-shRNA组和阴性对照组进行对比研究。采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测Glut-1-shRNA对TE-13细胞Glut-1 mRNA及其蛋白表达的影响。CCK-8法、FCM法和Transwell小室迁移实验分别检测沉默Glut-1表达后对TE-13细胞增殖、细胞周期和迁移的影响;同时采用蛋白质印迹法检测细胞迁移以及乏氧相关蛋白的表达情况。 结果:采用慢病毒将Glut-1-shRNA转入TE-13细胞后,可明显下调Glut-1蛋白(t=6.713,P<0.01)和mRNA的表达水平(t=4.181,P<0.05)。与阴性对照组相比,Glut-1干扰后细胞的增殖至72小时(t=3.097,P<0.05)和96h(t=3.497,P<0.05)明显被抑制,同时细胞的迁移能力可见下降,但是细胞周期至24小时未见影响;基质金属蛋白酶的MMP-9(t=6.895,P<0.01)和缺氧诱导因子HIF-1α(t=13.74,P<0.001)的表达明显下调,但是MMP-2的表达没有变化(t=2.582,P>0.05)。 结论:沉默Glut-1的表达可抑制食管磷癌细胞株TE-13细胞的增殖和迁移,并明显下调细胞内MMP-9和HIF-1α蛋白的表达,为寻找靶向治疗食管癌新靶点提供了初步的实验基础。
  • Methods: Cell line TE-13 were infected with a lentiviral vector carrying the Glut-1-shRNA, then the stably interference Glut-1 expression cells were selected and divided into 2 groups: Glut-1-shRNA group and negative control group. Real-time PCR and western blot analysis are used to measure the mRNA and protein levels of Glut-1 in negative control and Glut-1-shRNA infected TE-13 cells. The cell proliferation, cell cycle and migration are analyzed by CCK-8 assay, flow cytometry, transwell analysis respectively. Furthermore, the levels of proteins that involved in migration or hypoxia are analyzed by western blot. Results: Lentivirus mediated shRNA knockdown of Glut1 significantly downregulates the mRNA level (t=4.181, P<0.05) and protein level (t=6.713, P<0.01) of Glut-1. Compared with negative control, the proliferation (72h: t=3.097, P<0.05; 96h: t=3.497, P<0.05) of migration of TE-13 cells is significantly inhibited by Glut shRNA knockdown. However, the cell cycle has no significant changes at 24h after transfection. Moreover, the expression of MMP-9 (t=6.895, P<0.01) and HIF-1α (t=13.74, P<0.001) are significantly downregulated by Glut-1 shRNA knockdown. However, the expression of MMP-2 (t=2.582, P>0.05) is unchanged after Glut-1 knockdown. Conclusion: Glut-1 knockdown by shRNA significantly inhibits the proliferation and migration of TE-13 cells. And the levels of MMP-9 and HIF-1α are significantly downregulated by Glut-1 knockdown.